Нарушения показателей клеточного иммунитета у взрослых, соматически здоровых детей и детей, больных глаукомой
Балашова Л.М., Быковская С.Н., Кузнецова Ю.Д., Коробова Л.С., Кантаржи Е.П., Мухин В.Е.
Российский национальный исследовательский университет им. Н. И. Пирогова (НИЛ детской офтальмологии, отдел клеточных технологий и регенеративной медицины)
Морозовская детская клиническая больница, НП Международный научно-практический центр пролиферации тканей. Москва.
Цель: изучить клеточный иммунитет у взрослых соматически здоровых доношенных детей и при врожденной глаукоме, а так- же определить взаимосвязи количественного и функционального дефекта этих клеток с клинической картиной заболевания.
Важную роль в механизмах иммуносупрессии и ауторегуляции играют регуляторные клетки с фенотипом СД4+СД25+Foxp3+ (T-рег). У взрослых в норме Т-регуляторы (Трег) колеблются от 5 до 10 процентов, у здоровых детей в норме Трег 2-6 процентов общего числа СД4+ Т-клеток в лимфоидных тканях и периферической крови.
Эти клетки играют чрезвычайно важную роль в развитии разных типов иммунного ответа, в том числе иммунитета к аутоантигенам со снижением количества Т-регуляторов и нарушением их функции. Поэтому изучение функций Т-рег является важным в понимании патогенеза многих заболеваний, в том числе при возникновении врожденной глаукомы, и, особенно, при зарастании фистулы и фильтрационной подушечки в послеоперационном периоде с целью дальнейшей разработки новых методов клеточной иммунокоррекции изученных нарушений.
Материал и методы исследования.
Всего нами обследованa большая популяция взрослых и 17 детей, из них 10 – с врожденной глаукомой доношенных соматически здоровых детей в возрасте от 1,5 до 6 месяцев (исследуемая группа) и 7 доношенных соматически здоровых детей без глазной патологии в том же возрасте (контрольная группа). Представлены результаты «пилотного» исследования.
Отбор крови производили из вены во время введения в наркоз в пробирки с антикоагулятом ЭДТА. Кровь с антикоагулятом хранили при комнатной температуре (от 20 до 25 градусов) и подвергали первичной обработке и окрашиванию в течение 24 часов с момента забора, затем проводили анализ не позднее 24 часов после окрашивания.
На первом этапе исследования в цельной крови окрашивали лимфоциты соответствующими антителами с их последующим лизированием согласно протоколу. После инкубирования образцов измеряли иммунный статус на проточном цитометре. Обнаружение Т-регуляторных лимфоцитов проводили с использованием поверхностного окрашивания клеток с антителами СД4 и СД25 и внутриклеточного окрашивания антителами к Foxp3, количественное их определение - методом проточной цитометрии.
Уровни СД4+СД25+high р3+ Т-регуляторных лимфоцитов определяли методом проточной цитофлюориметрии (MACSQnant; Miltenyi Biotek, Germany), с использованием соответствующих антигенных детерминантных коньюгированных антител (CD45-Viob Blue, CDs-FLIC, CL4-APC-FITC, CL8PE, CL25- APC,Foxp3-PE; Miltenyi Biotec, Germany).
Статистическую обработку проводили с использованием программы «Statsoft Statistica v. 7». Достоверность полученных различий оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (сопоставление двух независимых групп данных по клиническим признакам в случае распределений, отличных от нормальных). Достоверными считались различия при р
Результаты обследования и их обсуждение.
Для оценки количественного содержания лимфоцитов и функциональной активности СД4+СД25+Foxp3+ сравнивали их содержание в группе с взрослыми, соматически здоровыми доношенными детьми без глазной патологии и с врожденной глаукомой.
При сравнении показателей взрослых и детей отмечалась достоверное различие по семи из девяти параметров, исключая индекс СД3+СД4+/ СД3+СД8+ и количество определенных цитотоксических лимфоцитов (p>0,05: взрослые 2,25+0,37 и 14,0+3,0% и дети 2,4+1,03 и 13,3+6,33%).
При сравнении детей с глаукомой и здоровых доношенных без глазной патологии определилась тенденция к достоверности, которую можно подтвердить при дальнейшем наборе данных по показателю трег (СД4+СД25+Foxp3+) (2,42+1,2 - 4,13+1,0 p
Не отмечено достоверности при исследовании по возрасту, сроку гестации и массе тела, СД3+ (общее количество Т-клеток) (60,4+16,8 - 75,1+7,8 p
В результате проведенного исследования установлено, что клеточный иммунитет взрослых и детей существенно различается по 7 из 9 параметрам; в крови соматически здоровых доношенных детей с врожденной глаукомой снижено количество Трег (СД4+СД25+Foxp3+) по сравнению с группой соматически здоровых доношенных детей (p
Заключение.
Результаты исследования показывают изменение количества Т- и В1- лимфоцитов у взрослых и соматически здоровых доношенных детей, исключая показатели Т-клеток-киллеров и индекс соотношения Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток.
При сравнении показателей клеточного иммунитета у детей с врожденной глаукомой и в группе без глазной патологии обнаружена тенденция к достоверности по количественному показателю Т-регуляторов, которую можно подтвердить или отвергнуть при дальнейшем наборе пациентов и наблюдению их в послеоперационном периоде.
Источник: VII Международная научно-практическая конференция «Пролиферативный синдром в офтальмологии» Сборник научных трудов, 2012, ноябрь, 29-30, Москва, Россия, стр. 152-154.
Примечание:
Материал для публикации на портале Орган зрения любезно предоставила Балашова Лариса Маратовна.
Иммунология глазной патологии. Внутриглазное давление, офтальмотонус, глаукома (glaucoma).
Внимание! Данная информация предназначена исключительно для ознакомления. Любое применение опубликованного материала возможно только после консультации со специалистом.
Разрешается некоммерческое цитирование материалов данного раздела при условии полного указания источника заимствования: имени автора и WEB-адреcа данного раздела www.organum-visus.com, www.eye-portal.ru, www.sabar.eye-portal.ru
Материал подготовил: Голубев Сергей Юрьевич.